EZ-LDH

EZ-LDH

Cell cytotoxicity assay kit

Catalog No.

Assay

EZ-LDH500

500 tests

EZ-LDH1000

1000 tests

Protocol
Brochure

EZ-LDH 는 WST(water soluble tetrazolium salt)를 사용하여  apoptosis 혹은 necrosis등에 의하여 죽거나 손상된 세포에서 방출되는 Lactate dehydrogenase(LDH)의 양을 고감도로 측정함으로써 cytotoxicity/cytolysis를 간단하고 정확하게 측정할 수 있는 kit 입니다.

 

Cytotoxicity (Cell death)는 cell viability test를 통하여 간접적으로 측정할 수 있지만, 더 sensitive하고, 정확한 측정을 위해서는 cell death 또는 cell damage와 관련된 효소를 이용한 방법으로 실험하는 것이 좋습니다. 

 

Lactate dehydrogenase(LDH)는 세포질에 존재하는 stable enzyme으로 통상적으로는 세포막을 통과하지 못하여 세포 밖으로 배출되지 않으나, 세포막이 손상되거나 세포가 죽는 경우 배지 중으로 방출됩니다. 그렇기 때문에 배지중의 LDH양은 죽거나 혹은 상해를 입은 세포의 수와 비례 하게 됩니다.

 

EZ-LDH cytotoxicity Assay kit는 이러한 LDH의 특성에 기반하여, 세포에서 방출된 LDH의 양을 water soluble tetrazolium salt (WST)를 이용하여 흡광도(450nm)를 측정하는 방식을 통해 cell cytotoxicity test를 간편하고 빠르게 수행할 수 있는 제품입니다.

 

 

Detection Method

Colorimetric - Absorbance at 450nm  (420-480 nm)

Sample type

Cell media

Assay type

Quantitative

Kit Components 

&

Storage Condition

  • WST Substrate Mix  : -20℃
  • LDH Assay Buffer : 0~4℃
  • Cell Lysis Solution : 0~4℃
  • Stop Solution: 0~4℃

Advantages

  • Fast : 1시간 내에 실험을 끝내실 수 있습니다.
  • Accuracy :  흡광도와 상해를 입은 세포의 수는 직선적인 상관관계를 나타냅니다.
  • Safety :  동위원소를 사용하지 않습니다.
                  시약 자체 독성이; 없어 실험 후, DNA  or RNA extraction, 
                  western blot, MTT 등 추가 실험이 가능합니다.
  • Sensitivity :  INT방식보다 더 정확한 측정이 가능합니다.
                        - 10% FBS 가 함유된 media 사용 가능.
  • Low background : 원료의 purity와 최적의 buffer 조성으로 
                                  background를 최소화하였습니다.
  • Flexibility :  Adherent cell과 Suspension cell 모두 사용 가능합니다.

Application

  • FaCytotoxicity assay
  • Cell mediated cytotoxicity assay
    NK activity : Natural Killer  cell 
    CTL :  Cytotoxicity T-Lymphocytes cell 
    CMC : Complement Mediated Cytotoxicity
    ADCC :  Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity 
    LAK :  Lymphokine Activated Killer cell

Fig. Assay Principle

세포에서 방출된 LDH는 Lactate를 탈수소화 시켜 Pyruvate과 NADH를 생성합니다.

이 NADH가 diaphorase의 촉매에 의해 WST를 환원 시켜 450nm 파장에서 흡광을 갖는 적색의 formazan을 형성합니다.

때문에 배지중의 LDH가 증가하면 formazan의 생성이 증가하여 흡광도가 증가하며, 이는 450nm의 흡광도 증대로 측정할 수 있습니다.