EZ-Cytox Plus는 자사의 EZ-Cxtox의 감도를 향상시킨 제품으로 적은 세포를 가지고 고감도 실험을 진행해야 하는 경우,
대사활동이 느려 오랜 시간 배양을 해야 하는 세포의 실험 등에 사용하시면 좋습니다.
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Detection Method |
Colorimetric - Absorbance at 450nm (420-480 nm) |
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Sample type |
Adherent cells, Suspension cells |
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Assay type |
Quantitative |
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Storage Condition |
0-4℃, Protect from light |
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Advantages |
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Application |
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EZ-Cytox의 WST는 mitochondria의 호흡사슬에 존재하여 살아있는 세포에서만 활성이 있는
탈 수소효소(Dehydrogenase)인 succinate-tetrazolium reductase에 의해 환원되어 formazan이라는 발색물질을 생성합니다.
따라서 시료중의 생존세포수가 증가하면 mitochondria의 탈 수소효소의 활성도 증가하며 formazan의 생성이 증가하여 흡광도가 증가합니다.
즉, formazan의 생성은 살아있는 세포수와 직선 상관관계를 가지며, 이는 흡광도를 측정함으로써 알 수 있습니다.
Fig2. EZ-CytoxPLUS 감도비교 테스트 ( vs 자사 EZ-Cytox, TaKa** 사 제품)
Q1 : MTT, MTS, XTT를 사용하는 타사 제품들과 WST를 사용하는 EZ-Cytox차이점은 무엇인가요?
타사 제품들과 기본적인 측정원리는 같지만, 각각의 tetrazolium salt에 의해 생성된 formazan의 물에 대한 용해성이 전혀 다릅니다. MTT의 경우는 물에 녹지 않은 크리스탈 형태의formazan을 형성하기 때문에 DMSO같은 유기용매나 계면활성제를 이용하여 용해해야 하는 번거로운 과정이 필요하며, MTS와 XTT는 MTT의 변형체로써 수용성의 formazan을 형성하지만, WST에 비해 용해성이 낮습니다. 때문에 WST를 사용하는 EZ-Cytox가 타사제품에 비해 감도가 높고, 측정범위가 넒은 장점을 가집니다. 또한, WST의 감도를 자사의 기술로 업그레이드시켜 WST를 사용하는 타사 제품과 동등하거나 더 좋은 감도로 측정이 가능합니다.
Q2: EZ-Cyotox를 첨가한 후 흡광도 측정 시 이용할 수 있는 파장의 영역은 어떻게 되나요?
450nm 에서 최대 흡광도 나타내므로 450nm를 사용하시는 것이 좋습니다. 하지만, 450nm filter가 없는 경우 420-480nm사이의 파장에서 측정이 가능합니다. 이 범위를 벗어나는 파장에서는 흡광도 값이 저하됨으로 권장해드리지 않습니다.
Q3: 96well 이외에 다른 크기의 well에도 사용이 가능한가요?
네, 가능합니다. 96well뿐 아니라 6well, 24well, 48well, 384well등 모든 micro well plat와 다양한 size의 dish에도 사용 가능합니다. 이런 경우 EZ-Cytox를 total volume의 1/10을 첨가해 주면 됩니다. ( 예: cell in media 200ul + 반응물질 100ul 인 경우 total volume이 300ul 이므로, 1/10인 30ul 의 EZ-Cytox를 well에 첨가해주면 됨.)
Q4: EZ-Cyotox는 세포 배양액만으로 cell vaiblity 측정이 가능한가요?
아닙니다. EZ-Cytox는 살아있는 세포내의 mitochondrial NADH-dehydrogenase activity에 의해 유색의 fomaza이 형성되는 원리를 이용하기 때문에, 세포와 glucose가 포함된 media에 첨가해야 합니다.
Q5: 현미경 관찰 시 세포들이 많이 죽은 것으로 보이는데, EZ-Cytox로 실험한 결과로는 viability가 높은 것으로 나옵니다. 왜 그런가요?
이런 경우 대부분 죽은 것으로 관찰된 세포들이 실질적으로는 damaged cell들로 아직 NADH-dehydrogenase 의 활성이 남아있어서 EZ-Cytox와 반응하기 때문입니다. 실험 목적상 이러한 damaged cell들을 죽은 것으로 counting 해야 한다면 wash out등으로 제거한 후 다시 측정하셔야 합니다.
Q6: Phenol red가 포함된 배지에 대해서도 측정이 가능한가요?
네, 가능합니다. Blank에서 phenol red에 대한 흡광도가 측정되기 때문에 sample 측정값에서 blank값을 빼주면 됩니다. 때문에 아주 짙은 색깔의 성분만 아니라면 다른 발색을 일으키는 성분 모두에 사용이 가능합니다.
Q7: EZ-Cytox로 실험한 세포를 이용하여 다른 test를 하고 싶습니다. 가능한가요?
네, 가능합니다. EZ-Cytox는 cell toxicity가 거의 없고, 세포에 영향을 주지 않기 때문에 EZ-Cyotx를 이용한 assay가 끝난 후, DNA나 RNA extraction및 western blot등 다른 실험들이 가능합니다.
